光度計是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析的測量儀。它主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。目前,它已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
光度計的基本工作原理是基于物質(zhì)對光百度(對光的波長)的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶,所以,當光色散后的光譜通過某一溶液時,其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下,溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系,即符合比爾定律。T=I/Io lg(Io/I)=εcb 式中,T為透過率,Io為入射光強度,I為透射光強度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數(shù),b為溶液的光徑長度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時,透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
光度計的特點:
1、采用高性能較好的光柵,波長精度更高;
2、采用進口鎢燈,發(fā)光效率高,使用壽命長,功耗降低;
3、超大規(guī)模集成,T/A轉(zhuǎn)換精度高,穩(wěn)定性高;
4、微機系統(tǒng)的應(yīng)用,使操作使用簡單可靠。
光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。